二、组织学研究方法

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二、组织学研究方法

(一)一般光学显微镜术

应用一般光学显微镜(简称光镜)观察组织切片是组织学研究的最基本方法。取动物或人体的新鲜组织块，先用固定剂(fixative)固定(fixation)，使组织中的蛋白质迅速凝固，防止细胞自溶和组织腐败。常用的固定剂如洒精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化锇等，一般常将几种固定剂配制成混合固定液，以抵消或减弱单种固定剂对组织的收缩或膨胀等缺点，达到更好固定效果。固定后的组织块(约3～5mm³大小)用石蜡、火棉胶或树脂等包埋(embedding)成硬块，以切片机(microtome)切成5～10μm厚的组织切片(tissue section)，切片贴在载玻片上经脱蜡等步骤后进行染色。组织块也可立即投入液氮(-196℃)内快速冻结，用恒冷箱切片机(cryostat)制成冷冻切片(frozen section)，这种方法制片迅速，细胞内酶活性保存较好，常用于酶组织化学染色。血细胞和分离培养的细胞可直接涂在玻片上，制成涂片(smear)。疏松结缔组织和肠系膜等软组织可撕成薄片铺在玻片上(铺片)，牙和骨等坚硬组织可磨成薄片(磨片)。组织切片等标本经染色、透明后，以封固剂和盖片封固，即可长期保存，镜下观察。

图1-1 坚牢绿(酸性染料)与亚甲蓝(碱性染料)的化学结构及其染色反应示意

染色(staining)是用染料使组织切片着色，便于镜下观察。天然和人工合成的染料甚多,它们都是含发色团的有机化合物，当染料具有助色团成为盐类物质，即可溶解于水并具电荷，与组织有亲合力，使组织着色。含氨基(-NH₂)、二甲氨基〔-N(CH₃)₂〕等碱性助色团的染料，称碱性染料(basic dye)，它的盐溶液具阳电荷；含羧基(-COOH)、羟基(-OH)或磺基(-SO₃H)等酸性助色团的染料，称酸性染料(acid dye)，它的溶液具阴电荷(图1-1)。组织的染色原理一般认为基于化学结合或物理吸附作用。细胞和组织的酸性物质或结构与碱性染料亲合力强者 ......